En los últimos años, la demanda de los consumidores por una producción animal sostenible y alimentos inocuos ha ejercido una mayor presión sobre la forma tradicional de uso de los aditivos nutricionales.
Siguiendo la tendencia global, países de América del Sur han comenzado a discutir de manera más incisiva la producción de animales libres de antibióticos y las consecuencias de este tipo de producción en la bioseguridad.
En el ámbito de la bioseguridad, se deben tener en cuenta diversos patógenos, ya sean virus o bacterias.
Uno de los principales agentes son las clásicas Salmonellas paratíficas, no tanto por su potencial patogénico en aves, sino por su potencial de contaminación de tejidos y posibles consecuencias para la salud pública.
En los últimos 5 años, entre las diversas Salmonellas paratíficas aisladas en la avicultura, se han destacado los serovares:
Siendo estos los más recurrentes en la producción avícola.
Para un programa de control de Salmonella eficaz, es fundamental enfocarse en los siguientes aspectos:
En este caso, las buenas prácticas de inocuidad no solo abarcan el control microbiológico de las fábricas de alimentos balanceados, las materias primas y el sistema logístico, sino también, y principalmente, el uso de aditivos alternativos a los antibióticos que establezcan correlaciones entre la salud intestinal y el control de Salmonella.
A nivel global, la industria avícola confía cada vez más en los probióticos y sus efectos beneficiosos en el ecosistema intestinal. Estos microorganismos vivos:
Entre los probióticos, los Bacillus son herramientas muy utilizadas y reconocidas por los diversos estudios que demuestran sus efectos positivos en la producción avícola. Sin embargo, es importante destacar que no todos los Bacillus son iguales.
Diferencias genéticas y funcionales entre estas bacterias determinan resultados distintos de germinación, respuesta inflamatoria, impacto en la integridad intestinal y la microbiota de las aves.
El Bacillus subtilis 29784 a ha demostrado ser capaz de actuar en la modulación de la microbiota intestinal, la integridad intestinal, la acción antiinflamatoria y la acción directa sobre bacterias patógenas como Clostridium perfringens y Salmonella (Rhayat et al., 2017; Rhayat et al., 2019; Jacquier et al., 2019; Tirano, 2020; Keerqin et al., 2021).
De hecho, estudios in vitro han demostrado la capacidad del Bacillus subtilis 29784 para disminuir el crecimiento de Salmonella Enteritidis, Salmonella Typhimurium y Salmonella Heidelberg entre otras, utilizando la metodología de zona de inhibición (ZOI).
Figura 1: Zona de inhibición demostrada mediante el uso de Bacillus subtilis 29784 en placas de agar contaminadas con Salmonella Heidelberg (Fuente: Laboratório Imunova).
Las metodologías in vitro son de gran importancia para la selección de aditivos nutricionales que puedan formar parte de programas de control de Salmonella. Sin embargo, la eficacia de aditivos debe ser acompañada de ensayos in vivo, con modelos de infección experimental.
En este sentido, se publicó en la reunión anual de la Poultry Science Association en Filadelfia, EE.UU., en julio de 2023, el trabajo titulado “Efecto de Bacillus subtilis 29784 (Alterion NE – Adisseo) para reducir la colonización por Salmonella Heidelberg en pollos de engorde desafiados.
Los estudios se llevaron a cabo en colaboración con Laboratorios Mercolab en Cascavel, Paraná, Brasil, siguiendo metodologías estandarizadas y publicadas. Estos resultados se presentarón en la Reunión anual de la Asociación de Ciencias Avícolas en Filadelfia Estados Unidos en julio de 2023 (Quinteiro Filho, WM; Fagundes, NS; Berto, R; Back, A. Effect of a Bacillus subtilis 29784 on Salmonella Heidelberg prevalence and liver invasion in broiler chickens, Poultry Science, v. 102, Esuppplement 1, p 138, 2023).
Se realizaron tres experimentos desde el día 1 hasta el día 28 de vida, divididos en dos tratamientos:
- CP – control positivo con Salmonella Heidelberg;
- BS – Bacillus subtillis 29784 – 1×108 UFC /500 g, vía alimentación ad libitum.
Las aves fueron desafiadas a los 3 días de edad con una cepa de Salmonella Heidelberg (concentración final de 1,0 x 106 UFC/mL, dosis de 0,5 mL/ave), aislada del campo en una integración de pollos de engorde.
Esta cepa fue hecha resistente a los antibióticos (ácido nalidíxico y novobiocina) para permitir el recuento de unidades formadoras de colonias en placas de agar.
Para mimetizar las contaminaciones por Salmonella a campo, se emplearon dos métodos de desafío diferentes. En los experimentos 1 y 3, se utilizó el método Seeders.
En este método, se contamina el 20% de las aves por gavage (oral), y estos pollos sirven como “sembradoras” de Salmonella para el resto de los animales (Figura 2).
En el ensayo 2, se utilizó la metodología tradicional de infección oral por gavage, en el 100% de las aves. Un total de 380 pollos de engorde mixtos Cobb de un día de edad fueron alojados en estos tres experimentos, y se dividieron de la siguiente manera:
- Experimento 1 – 50 aves/tratamiento;
Experimento 2 – 50 aves/tratamiento;
Experimento 3 – 100 aves/tratamiento.
En cada experimento, los grupos se alojaron en salas aisladas e idénticas, ubicadas una al lado de la otra, con entradas y salidas de aire independientes y cama nueva de viruta (Figura 3).
A los 14 y 28 días de edad, se recolectaron muestras individuales de ciegos (e hígado en el experimento 3) de 20 aves por tratamiento.
- Las muestras cecales se prepararon y se sembraron en agar verde brillante para el recuento de colonias y la confirmación bacteriana se realizó mediante métodos bioquímicos y serológicos.
Finalmente, los recuentos de Salmonella Heidelberg cecal se transformaron en log10 y se evaluaron mediante la prueba t (5%), mientras que los datos sobre la invasión hepática por Salmonella Heidelberg se sometieron a la prueba de chi-cuadrado (5%).
- En el Experimento 1, las aves del grupo Bacillus subtilis 29784 presentaron una reducción en el recuento cecal de Salmonella Heidelberg de 1.079 (P < 0,0001) y 1.271 (P = 0,0011) log10 UFC/g a los 14 y 28 días de edad, respectivamente.
- Sin embargo, en el experimento 2, esta reducción solo se observó a los 14 días de edad (reducción de 1.817 log10, P = 0,0002), lo que indica que el desafío mediante la metodología Seeders también es adecuado para evaluar Salmonella Heidelberg en pollos de engorde.
En el ensayo 3, Bacillus subtilis 29784 no redujo el recuento cecal de Salmonella Heidelberg a los 14 días, pero sí lo redujo en 0,995 log10 a los 28 días
(P = 0,0006).
Además, Bacillus subtilis 29784 redujo el número de aves positivas para Salmonella Heidelberg cuando se analizaron muestras de hígado a los 28 días (P = 0,0060). Las figuras 4, 5 y 6 ilustran estos resultados.
En conclusión, estos estudios demostraron que Bacillus subtilis 29784 reduce la colonización por Salmonella Heidelberg en pollos de engorde, siendo una herramienta importante para los programas de control de Salmonella en la avicultura.
El uso de aditivos nutricionales que apoyan los programas de salud intestinal y control de Salmonella son una realidad, pero la elección de herramientas con evidencia científica es obligatoria.
La reducción de la inflamación intestinal y la modulación de la microbiota se suman a los efectos directos de las cepas probióticas sobre la prevalencia de Salmonella paratíficas.
Bacillus subtilis 29784 ha demostrado ser eficaz en el control de diversas cepas de Salmonella paratíficas y en este artículo presentamos resultados in vitro e in vivo que respaldan su potencial para el control de Salmonella Heidelberg.
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