El objetivo del presente estudio fue evaluar la excreción de la cepa vacunal de Salmonella typhimurium en pollos de engorde vacunados vía gel conjuntamente con un producto de alimentación temprana para aves. Todo el estudio se llevó a cabo en condiciones comerciales de producción de broilers.
Las vacunas contra salmonella son una de las principales herramientas disponibles para controlar la infección de los lotes de aves. Cuando se aplican en forma conjunta con otras medidas, tales como un buen manejo de las explotaciones, la bioseguridad, la higiene, el control de plagas e insectos, ayudan al control de la colonización de salmonella en el intestino.
OBJETIVOS DE LA VACUNACIÓN
El objetivo de la vacunación es la prevención y reducción de la colonización intestinal y de los tejidos del aparato reproductor, resultando en una disminución de la excreción de las salmonela y por ende de la contaminación fecal de las cáscaras de los huevos como consecuencia de la inducción de una respuesta inmune adaptativa del sistema inmune innato.
En última instancia, el principal objetivo de la vacunación es prevenir la transmisión de enfermedades zoonóticas de Salmonella spp a los seres humanos.
VACUNAS VIVAS
Generalmente se acepta que las vacunas vivas atenuadas son más eficaces para el control de Salmonella que las vacunas muertas.
Varios estudios demuestran que las vacunas vivas estimulan un aumento de la síntesis de IgA después de una vacunación, hecho que se considera muy relevante para prevenir la colonización inicial del intestino de las aves.
Con el fin de que puedan proteger a las aves, las cepas de las vacunas vivas deben poder multiplicarse y persistir en los tejidos del ave durante un tiempo suficiente como para inducir una respuesta inmune protectora, pero la cepa no debe ser virulenta y luego de cumplido ese lapso debe desaparecer de las aves.
En el mercado existe actualmente una vacuna viva de Salmonella typhimurium autorizada para su aplicación en pollos de engorde y en los últimos años está aumentando su uso como herramienta de control de Salmonella, aunque hay poca información disponible en cuanto a su administración en incubadora y posterior efecto en la excreción y por lo tanto protección de pollos de engorde frente a cepas salvajes.
ESTUDIO, Administración en incubadora de una vacuna viva de Salmonella typhimurium en pollos de engorde
OBJETIVO
El objetivo del presente estudio fue evaluar la excreción de la cepa vacunal de Salmonella typhimurium en pollos de engorde vacunados vía gel conjuntamente con un producto de alimentación temprana para aves. Todo el estudio se llevó a cabo en condiciones comerciales de producción de broilers.
MATERIALES Y MÉTODOS
Vacuna aplicada en pollitos en la incubadora:
Se utilizó una vacuna viva de Salmonella typhimurium autorizada para su uso en pollos de engorde que contiene como mínimo 1 x108 y máximo 6 x 108 UFC* de la bacteria viva atenuada Salmonella typhimurium, cepa Nal 2/Rif 9/Rt.
Otros productos utilizados:
- Diluyente de vacunas en formato de gel.
- Producto de alimentación temprana en aves.
Distribución en granja de pollitos vacunados:
Los pollitos vacunados se distribuyeron en las siguientes granjas:
Aplicación de la vacuna:
- La vacuna se aplicó en la incubadora vehiculizada en un diluyente en formato de gel incluyendo en el mismo un producto de alimentación temprana para aves junto con una vacuna de coccidia (en una de las granjas) y 2 vacunas de bronquitis.
- La dosis de aplicación de la vacuna fue de 25 ml por cada 100 aves por lo que la dosis teórica por pollo fue de 0,25 ml, en la que se incluía una dosis de vacuna.
Evaluación de viabilidad /cuantificación de la vacuna en incubadora:
- Para poder confirmar que la vacuna mantenía su viabilidad, se tomaron 6 muestras después de mezclarla con el gel y el producto de alimentación temprana, de 5 ml cada una, comprendiendo el inicio y el final de la jornada de nacimientos.
- Dichas muestras se analizaron mediante cultivo utilizando el medio selectivo BPLS (Agar-Verde brillante-Rojo de fenol-lactosa-sacarosa) al cual se le añadió como suplemento 100 μg/ml rifampicina por ser un antibiótico marcador de la cepa vacunal.
Evaluación de la correcta vacunación de los animales:
Para evaluar la homogeneidad de la vacunación se realizó un conteo de lenguas azules por lote, estableciendo que, para que se diese por correcta, al menos un 90% de los animales tuviesen la lengua teñida.
Evaluación de la excreción vacunal:
- Para evaluar la excreción de la cepa vacunal se tomaron hisopos cloacales y se aplicó el método de PCR utilizando el kit PCR multiplex RapidFinder™ Salmonella especies, (Thermo Scientific™), que permite diferenciar
- la salmonella vacunal.
- Se hicieron muestreos de 100 aves/nave a los 3-5 días de edad, con posterior repetición a los 14 días.
- De cada nave muestreada se hicieron pooles de 5 torundas, de modo que de cada nave se analizaron 20 muestras (cada una compuesta por 5 hisopos).
RESULTADOS
Evaluación de la correcta vacunación:
La inspección visual de lenguas teñidas de azul, correspondiente con animales bien vacunados, mostró los siguientes resultados:
Para dar por válida una vacunación, al menos el 90 % de animales han de tener la lengua teñida. En este caso, los tres lotes se consideraron bien vacunados.
Resultados de estabilidad de Salmonella vacunal en la disolución:
Los resultados de los cultivos hechos por diluciones para hacer la titulación de las muestras vacunales expresados como ufc/ml, se muestran en la Tabla 1.
Según los resultados, teniendo en cuenta la concentración inicial y la concentración final en las muestras vacunales y visto que se mantiene estable en niveles de 108 ufc, se puede concluir que no se pierde titulación debido al manejo de la vacunación en sala.
Tabla1. Resultados de recuento de salmonella en medio BPLS + Rifampicina
Detección de Salmonella vacunal en torundas cloacales:
En la Tabla 2 se muestran los resultados obtenidos de los pooles (n=20), de torundas cloacales procedentes de las tres naves estudiadas a diferentes días analizados por PCR:
Tabla 2. Resultados de Salmonella vacunal por PCR.
En el primer muestreo (3 días), en las tres naves, los resultados de PCR para la detección de la cepa vacunal, se obtuvo un 100% de positividad. Se considera que un lote está bien vacunado cuando las muestras positivas son > 80% de muestras analizadas.
En el segundo muestreo a día 14 se encuentran diferencias entre las naves analizadas. Esta variabilidad puede deberse a las diferencias en susceptibilidad en la colonización de las aves, así como estar relacionado con la naturaleza aleatoria del muestreo para la detección de salmonella vacunal.
En los Gráficos 1 y 2 se muestran las gráficas de amplificación de PCR en tiempo real de las muestras por nave y a los diferentes días del estudio:
Gráfico Nº1. Resultados Salmonella vacunal PCR a día 3 y 5
Gráfico Nº2. Resultados Salmonella vacunal PCR a día 14
Estudio estadístico de homogeneidad de excreción de salmonella:
Se realizó un estudio estadístico para comprobar que los datos de excreción obtenidos por PCR tomados a días 3 y 5 respectivamente eran homogéneos entre las tres naves, teniendo como resultado que tanto el valor de la moda, como la media y los valores de excreción máximos y mínimos en cada nave eran muy similares.
Así mismo, según el análisis de la varianza se puede concluir con un intervalo de confianza del 95% que no hay diferencias significativas, por lo que se puede confirmar que la excreción es homogénea entre lotes vacunados.
La excreción de salmonella vacunal a días 3-5 es del 100% de las muestras independientemente del lote. Este hecho, confirmado mediante análisis estadístico confirma que la excreción entre lotes vacunados es similar.
A día 14 existen más diferencias en la excreción, si bien hay que tener en cuenta las diferencias en cuanto a susceptibilidad en la colonización, así como la propia naturaleza aleatoria de los muestreos.
CONCLUSIONES
A la vista de los resultados se puede concluir que:
- La vacunación con vacuna viva de Salmonella typhimurum vía gel aplicada en incubadora junto con otras vacunas de bronquitis y coccidiosis ha demostrado tener una muy buena distribución en los animales, lo que se pudo constatar por la tinción de lenguas de las aves en porcentajes ≥ 90%.
- La estabilidad de la vacuna se mantiene durante su manejo en la sala de incubación donde la concentración de salmonella estuvo comprendida entre 2,0 x 108 – 3,8 x 108 ufc/ml en las muestras comprendidas entre el inicio y el final de la jornada de nacimientos
Como conclusión final, el aplicar la vacuna vía gel en la propia incubadora tras el nacimiento con una alta viabilidad vacunal, supone una mejora con respecto a la aplicación en agua de bebida donde otros factores como agentes sanitizantes o biofilms en las conducciones de granja pueden reducir su eficacia.
Además, los animales están protegidos frente a una posible contaminación durante el transporte a la granja y exposición al ambiente interior de la nave donde puede que cepas salvajes de salmonella estén presentes. Además, es importante tener en cuenta que la excreción de la cepa vacunal es un factor determinante de protección en el proceso de exclusión competitiva frente a otras salmonelas salvajes.
