Imunopatologia da Bolsa de Fabricius com ênfase na Doença de Gumboro

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O birnavírus causador da doença de Gumboro, não é o único que compromete a bursa de Fabricius e outros órgãos linfóides, porém é o mais importante.

O sistema imune é estratégico. A demanda por eficiência imune resulta da pressão ambiental, incluindo falha na biosseguridade e redução de uso dos antibióticos. Isso requer efetivos estímulos à resposta imune individual do animal, ou do rebanho, ao mesmo tempo com que se adéqua o galpão às cepas vacinais.

Vamos rever o sistema imune das aves, e sua maior ameaça, ou seja, a doença de Gumboro; sua imunopatologia, e as lesões advindas da “agressão”vacinal além de alguns pontos não muito considerados, quando o assunto é discutido.

O birnavírus causador da doença de Gumboro, não é o único que compromete a bursa de Fabricius e outros órgãos linfóides, porém é o mais importante, até pela resistência do mesmo e sua capacidade de contaminar as instalações, notadamente em face do hábito de reuso da “cama”, além da sua infecciosidade, patotipagem e mutabilidade (novas variantes).

Isso requer vigilância total dos produtores de vacina e monitoramento de campo.

MORFOLOGIA / HISTOLOGIA

As células que compõem a bursa de Fabricius, são linfócitos B adultos ou imaturos que apresentam receptor IgM , e em menor proporção, células T, macrófagos, células dendriticas, além dos estromas epitelial e conjuntivo do órgão e o substrato vascular.

O tecido linfóide se distribui pelo organismo, como na cavidade nasal, esôfago cervical e torácico, pró- ventrículo, placas de Peyer, tonsilas cecais, reto, além de timo, baço, fígado, entre outros.

Estão sempre presentes células dendriticas, células B e células T, e dependendo do folículo, o predomínio é de células B e por vezes, células T. O contato com o antígeno regula o desenvolvimento desses núcleos germinativos, notadamente no GALT.

Os órgãos primários, como a bursa de Fabricius e o timo ( células B e T, respectivamente), atrofiam com respectivamente 16 -e 17 ou mais semanas, e o tecido linfóide secundário, se encarrega de toda a reação imune.

O intestino é o maior tecido linfóide com milhares de conglomerados intra epiteliais e centenas de placas de Peyer (entre 200 a 300), além das tonsilas cecais.

A IMUNOPATOLOGIA

A saúde das aves depende desses parênquimas. Alguns agentes possuem tropismo por eles, como o birnavírus, que afeta células B imaturas e em divisão, e o gyrovírus que afeta as células T, causando a anemia infecciosa aviária. Outros, como o vírus causador da doença de Newcastle, e algumas bactérias e toxinas, lesionam o tecido.

Na DG aguda, em animais entre 2 a 6 semanas, há inflamação “bursal” e severa depleção linfóide (necrose). A mortalidade varia de 20 a 30%, e macroscopicamente ocorre edema do órgão, e com a continuidade, depleção e atrofia.

O edema eleva seu peso a 6 g; perdura por 3 dias, com atrofia após 3-5 dias. Interessantemente há produção de anticorpos, a partir de células B maturas, multilocadas. Essas células resistem mais ao vírus que as imaturas.

O título da a.c, chega a 1: 1000. Essa patologia ocorre após declínio dos anticorpos passivos. A histopatologia mostra depleção a partir da medular dos folículos, com necrose linfóide e edema inflamatório, além de característica infiltração heterofílica.

Posteriormente os folículos retraem, com hipoplasia e atrofia, além de fibroplastia interfolicular,acompanhado de infiltração macrofágica nas regiões centrais. Ocorre formação pseudocística. A lesão regenera desde que se mantenha íntegra a membrana basal, a qual é revestida por células dendriticas ativantes de genes responsáveis pela clonagem de células B.

Esse fenômeno foi bem caracterizado por Ivan; J ( 2001) usando como marcador, o carboidrato de Lewis, que indica a conversão gênica. Isso relativiza bastante a bursometria e sua interpretação.

A forma clássica de DG, vem sendo substituída por aquelas devidas às variantes virais ( vvIBDV). Nessas, se observa uma rápida imunodepressão, com elevados índices de mortalidade, ocorrendo mais precocemente, e rompendo as defesas passivas com facilidade. A característica lesão bursal aguda e a fase clinica, podem não ser percebidas. As variantes dependem da região, e a patotipagem varia.

Essas variantes levaram às novas vacinas, programas e monitoramentos. Cepas suaves, intermediárias, intermediárias plus e quentes, estão ligadas ao nome do pesquisador que a descreveu, como Lukert, Winterfield etc, ou indicações alfanuméricas como D78, V 877 etc. Essas denominações, são confusas, e já foi proposto um novo sistema para designar esses isolados ( Jackwood, DJ; 2018)

Imagem 1. Cinética da infecção (PI) Abdul R ( 2011)

Após 5 h PI: Viremia primária e chegada à bolsa, seguido por viremia secundária em conglomerados linfóides em outros órgãos. Na bursa de Fabricius e no baço é onde o vírus atinge sua concentração máxima.

De acordo com Abdul R ( 2011); o vírus permanece na bursa de Fabricius por 21 dias, sendo baixíssima a concentração em outros tecidos.

O vírus permanece na “cama” dos frangos e na poeira por 60 e 28 dias respectivamente, requerendo a investigação da sobrevivência das cepas vacinais, importante no controle epidemiológico.

Resumindo, o birnavírus afeta células B com receptor IgM em fase de divisão. Já as células T são totalmente refratárias e importantes na inflamação e controle viral. Assim, como resultado da divisão viral nessas últimas, há inflamação, necrose/apoptose e depleção.

Essa lesão é também produto de cepas vacinais, como as intermediárias plus por exemplo. As lesões refletem o “take” da vacina, que guarda relação com os anticorpos passivos. O anticorpo ativo se produz nos núcleos germinativos.

ENVOLVIMENTO DAS CÉLULAS NA RESPOSTA IMUNE/INFLAMATÓRIA E ADAPTATIVA

Macrófagos e APCs (células apresentadoras de antígenos) : Fagocitose e reconhecimento antigênico. Contatam o agente infeccioso ou vacinal. A partir delas sobrevém uma cascata de informações. Para tal, por influência dos genes inflamatórios, reguladores e outros, liberam citoquinas como a IL1 (alvo células Th 2 e células B) , IL8 (alvo células T e neutrófilos), a IL12 que tem como alvo os linfócitos TH1 e células NK (“neutral killers”), a IL 18 (alvo, linfócitos TH1), sem contar o TNF ( fator de necrose tumoral).

Linfócitos T , CD4 e o CD8 , sendo que após a ativação pelos macrófagos e APCs o CD4 acaba se diferenciando em “helpers TH2 . Existem dois ramos da resposta imune, a celular (TH1) e a humoral (TH2). O ideal é que ambas sejam estimuladas. Esses linfócitos T, quando ativados elaboram interleucinas, entre inflamatórias e não inflamatórias.

A rigor o TH1 libera as IL1, IL3, IL15, IL17, com várias células alvo entre macrófagos e outras. Já o TH2 libera as interleucinas, IL3, IL4, IL5, IL9, IL10, IL13, basicamente com os mesmos alvos. A tendência é sempre o equilíbrio entre essas interleucinas e suas funções. Por exemplo, a interleucina não inflamatória, como a IL10, contrabalança os efeitos da IL12, nitidamente inflamatória. Nas avaliações laboratoriais, em geral usando ELISA ou biologia molecular, as IL6, IL18, IL8, IL12, IL1, IFN gama, são essencialmente inflamatórios. As células T ativadas também produzem proteínas líticas, como as perforinas, que participam da necrose das células B infectadas.

Células B, ou são estimuladas pelas células T como vimos acima, ou interagem diretamente com o antígeno, levando a formação de anticorpos, após a ativação dos linfócitos T nos núcleos germinativos, como os do baço, principalmente. Produzem, evidentemente uma maior concentração de interleucinas não inflamatória, com as IL10 e IL14.

Por outro lado o linfócito T CD8 é toxigênico para células que albergam antígenos, principalmente virais, e as células NK ( neutral killers), um tipo de linfócito, intervém quando os outros mecanismos de “limpeza”falham, e não são capazes de reconhecer células infectadas. Essas células também dependem de interleucinas.

O acima exposto é uma noção do processo de resposta, e a abordagem de todos os mecanismos imune escapam ao objetivo dessa revisão. Tampouco se mencionou a maneira pela qual os macrófagos e células apresentadoras de antígenos contatam com os diversos agentes patogênicos antes de iniciar a cascata “imunidade inata/adquirida”.

Nessas células existem dezenas de receptores capazes de reconhecerem antígenos (TLRs), e no caso do birnavirus, principalmente o TLR 3. Importantes são também alguns receptores de globulinas (FCyR), envolvidos na ligação com os imunocomplexos.

Na bibliografia se incluem algumas referências que podem ser úteis a quem quiser se aprofundar.

A IMUNOPATOLOGIA DAS CEPAS VACINAIS

Os anticorpos maternais protegem por 3 semanas. A IgY se origina do contato entre as aves com o vírus a campo ou vacinal. O pico de anticorpos, na imunidade ativa, se situa entre 3 a 5 semanas.

O vírus vacinal, quando inativo não se multiplica no ambiente. O mesmo para as vacinas vetorizadas.

O vírus atenuado, além de quebrar a barreira dos anticorpos maternais, coloniza a bursa de Fabricius e o ambiente. Quanto maior a atenuação do vírus, menos ele rompe anticorpos passivos e menor é a capacidade de multiplicação. As vacinas de imunocomplexo, (exemplo, a cepa V877), não são convencionais. Nelas há uma combinação entre um volume de vírus atenuado, com o volume exato do anticorpo neutralizante pré elaborado.

Esse conjunto se liga a receptores de globulinas FcRs , mais propriamente o receptor FCy-CHIR-AB1, que está disposto, em grande quantidade em neutrófilo, linfócitos e principalmente macrófagos e células dendriticas foliculares, nos núcleos germinativos, auxiliado pelo complemento C3 presente no soro.

O ICX resiste aos anticorpos maternais. O anticorpo conjugado previne a ação do anticorpo passivo por semanas, o que permite a baixa de título do a.c passivo.

Assim, se protege o antígeno vacinal imunocomplexado ( icossoma). Parte do vírus vacinal liberado, multiplica, e as lesões bursais em função disso.

No entanto, a produção de anticorpos de alta afinidade e clonagem de células T e B diferenciadas ocorrem a partir da interação ICX/células dendriticas foliculares nos núcleos germinativos, como o esplênico, que são anteriores às lesões na bursa de Fabricius.

No entender do autor, as lesões bursais, indicam apenas o “take” da vacina e não guarda relação com a produção de anticorpos.

Imagem 2: Bolsa de aves vacinadas exibindo hipoplasia folicular e retração folicular com aproximadamente 14 dias após vacinação

Imagem 3: Bolsa de aves vacinadas, exibindo total repopulação linfoide Aproximadamente 28 dias após.

Vantagens potenciais advindas do uso dessa tecnologia ( Haddad E.E; 2016):

Maior tempo de exposição do antígeno aos diversos efetores imunes, como as células dendriticas foliculares, células B e células T (Imunidade ativa e adaptativa).

Proteção acentuada contra os anticorpos passivos.

A imunidade, decorre da estimulação das células B que predominam nas áreas de células dendriticas foliculares nos núcleos germinativos, seguidas pela ativação das mesmas pelas células T . A mutação e clonagem das células B as diferenciam como produtoras de anticorpos de elevada afinidade e pela produção de células de memória.

A multiplicação do vírus vacinal auxilia a mudar o padrão da população viral do galpão.

O tipo de imunoglobulina produzida com uma vacina ICX tende a ter mais afinidade do que o obtido a partir de vírus livre.

O autor chama a atenção quanto à excelência do arsenal vacinal que se dispõem no Brasil, mas também à necessidade de monitoramento efetivo de uso e a perfeita caracterização da sobrevivência das cepas vacinais no ambiente.

BIBLIOGRAFIA