Estudio retrospectivo de tumores de origen desconocido en reproductoras pesadas en EE.UU. (2011 – 2020)

• Por este motivo, la relevancia de realizar más pruebas diagnósticas para evaluar la etiología.

En los últimos años, ha aumentado el número de casos de reproductoras pesadas con tumores remitidos al NCVDLS.

Los objetivos de este estudio fueron:

1. Evaluar la incidencia de lesiones LL en casos de diagnóstico presentados al NCVDLS entre 2011 y 2020.
2. Investigar más a fondo la etiología de estos tumores utilizando técnicas moleculares.

Selección de casos

• Se seleccionaron casos de reproductoras pesadas diagnosticados como LL, sarcomas histiocíticos (HS) y/u otros sarcomas por histopatología e inmunohistoquímica por el NCVDLS entre Enero del 2011 a Febrero del 2020 (objetivo 1).
• Seis casos adicionales con las mismas características histopatológicas que los anteriores fueron evaluados molecularmente en NCSU (objetivo 2).

Histopatología

Los tejidos fueron fijados en formalina al 10%, deshidratados e incluidos en parafina de forma rutinaria. Secciones de 5 μm se tiñeron con hematoxilina y eosina y se examinaron en el microscopio.

Inmunohistoquímica

Las tinciones con los anticuerpos monoclonales CD3 (1:150; DAKO) y PAX5 (1:50; BD) se llevaron a cabo en un Thermo Autostainer 360 con sustrato ImmPACT AEC, cromatógeno Peroxidasa roja y contratinción con Hematoxilina de Mayer.

• Los controles positivos fueron secciones de bolsa de Fabricio y timo de controles negativos, así como tinciones en el que el anticuerpo primario se sustituyó con buffer.

gPCR

El ADN fue extraído de tumores congelados o de impresiones de tumores tomadas en tarjetas FTA. Se usaron cebadores específicos para los virus de Marek oncogénicos y para DNA proviral de REV, ALV-A, ALVB/D y ALV-J (Tabla 1).

• Las muestras se consideraron negativas cuando el gen del pollo GAPDH usado como control interno se amplificó pero el gen del virus no. Las condiciones del qPCR usadas han sido publicadas previamente.

Figura 1. Frecuencia de tumores en reproductoras pesadas diagnosticados en el NCVDL como leucosis linfoide (LL), Sarcomas (fibrosarcomas y/o sarcomas histiocíticos), o LL más sarcomas histiocíticos (HS).

Tabla 3. Diagnóstico molecular de tumores que habían sido diagnosticados como LL por histopatología.

Los resultados de este estudio demuestran que no es raro detectar tumores (LL y/o sarcomas) en parvadas de reproductoras pesadas en ausencia de retrovirus exógenos.

Hubo 42 casos que fueron diagnosticados como LL (28), LL y HS (4), y otro tipo de sarcomas, principalmente fibrosarcomas y HS (10) por el NCVDLS.

Desde 2011 hasta 2016, la incidencia fue baja (1-2 casos por año), pero aumentó en 2017 (6 casos), 2018 (19 casos) y 2019 (10 casos).

El aumento de la incidencia desde 2017 podría ser real o podría deberse a una mayor vigilancia en años más recientes.

Las lesiones de LL/sarcoma tienden a aparecer en parvadas de reproductoras pesadas que, por lo demás, están sanas y no tienen un exceso de mortalidad.

• Por lo tanto, es posible que los casos se hayan pasado por alto en el pasado.

LL y HS se diagnosticaron en parvadas más jóvenes (promedio de 34-38 semanas) que los sarcomas (promedio de 50 semanas) como ya se ha descrito previamente en tumores inducidos por retrovirus.

Las características histológicas (población celular homogénea, transformación intrafolicular en la bursa) y los hallazgos inmunohistoquímicos (tumores de células B) de los tumores LL son idénticos a los inducidos por ALV exógenos y REV.

• Sin embargo, en los seis casos en los que se realizó diagnóstico molecular no se detectó ADN proviral de ALV exógenos y/o REV; demostrando que estas lesiones fueron inducidas por retrovirus endógenos o se produjeron espontáneamente.

Es probable que los casos informados en este estudio se deban a retrovirus endógenos, ya que todos ellos involucran pollos de emplume lento que portan un retrovirus endógeno de replicación completa (ev-21) en sus genomas.

• Otros factores también podrían contribuir a una mayor incidencia. Se sabe que las vacunas MDV-2 (es decir, SB-1) pueden potenciar las lesiones de LL inducidas por retrovirus (REV, ALV exógeno y ALV endógeno).

Se desconocía el estado de vacunación de los 42 lotes de reproductoras pesadas presentados al NCVDLS.

• Sin embargo, de los 6 casos evaluados en NCSU, cinco de ellos fueron vacunados con SB-1.

Curiosamente, las muestras en el caso que no fue vacunado con SB-1 también dieron positivo para MDV-2 por qPCR y secuenciación del genoma completo (resultados no presentados), probablemente debido a una exposición de campo.

• Los mecanismos exactos por los cuales MDV-2 incrementa la frecuencia de LL no se conocen y es necesario realizar más estudios.

Este estudio demuestra la relevancia del diagnóstico etiológico en casos de lesiones de LL/sarcoma en campo.

Si bien los ALV exógenos y REV podrían tener consecuencias desastrosas para la industria avícola, el ALV endógeno y los tumores espontáneos tienen una relevancia económica mínima.

PDF