Para leer más contenidos de Avinews Febrero 2016
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Se han descrito los siguientes serotipos de adenovirus: FAdV-1, FAdV-2, FAdV-3, FAdV-4, FAdV-5, FAdV-6, FAdV-7, FAdV-8a, FAdV-8b, FAdV-9, FAdV-10 y FAdV-11 agrupados según criterios moleculares en 5 especies: A,B,C,D y E -Figura 1-.
En los brotes reportados de HCI -Hepatitis por Cuerpos de Inclusión-, varios de estos serotipos se han visto involucrados en solitario, con otros serotipos o en asociación con otros agentes infecciosos como el virus de Gumboro o el virus de la anemia infecciosa.
Los Adenovirus aviares (FAV-I) están asociados a diferentes entidades clínicas:
Sin embargo, también pueden ser aislados de animales sanos, hecho que dificulta el diagnóstico ya que podemos detectar el virus o anticuerpos circulantes tras una exposición, sin apreciar signos clínicos.
La transmisión de la enfermedad puede ser vía vertical y vía horizontal.
La primera se produce cuando un lote de reproductoras se infecta en la fase de puesta y transmite el virus a su descendencia.
La transmisión suele durar pocas semanas hasta que el nivel de anticuerpos, frente al serotipo implicado, neutralice la transmisión.
En el caso de la transmisión horizontal, se produce en aves susceptibles sin anticuerpos específicos del serotipo tras el contacto con animales enfermos.
Figura 1. Clasificación del Grupo I de Adenovirus aviares (FAV-I)
El diagnóstico definitivo de un brote de HCI debe hacerse, no sólo en base a los signos y lesiones macroscópicas, sino con la ayuda del diagnóstico laboratorial, mediante:
El diagnóstico definitivo de HCI se debe realizar con la ayuda del diagnóstico laboratorial
La posterior caracterización mediante virusneutralización o genotipado del virus, nos permite conocer el serotipo implicado.
En España, desde el año 2011 hasta la actualidad, ha habido un incremento en el número de casos de HCI, tanto en recría de reproductoras pesadas como en pollos de engorde. Debido a ello, en el CESAC se pusieron a punto técnicas basadas en biología molecular para realizar el diagnóstico etiológico y conocer los serotipos implicados. A continuación se detallan los resultados obtenidos basados en métodos serológicos y moleculares, desde 2012 hasta la actualidad.
Debido al incremento de casos de Hepatitis por Cuerpos de Inclusión, se decidió incluir en los programas de control sanitario del CESAC, la determinación de anticuerpos frente FAV-I mediante la técnica de ELISA para conocer:
Muestras
Los análisis se realizaron a partir de sueros de lotes de reproductoras y broilers que llegaron a nuestro laboratorio provenientes de diversos puntos de España.
Técnica
La técnica utilizada para la detección de anticuerpos frente a FAV-I fue ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay) indirecto de la casa comercial BiocheK (Fowl Adenovirus Group I Antibody Test Kit, CK 132).
La dilución final del suero fue 1/100. La técnica de ELISA se realizó siguiendo las indicaciones recomendadas por el fabricante del kit.
Interpretación de los resultados del kit de ELISA FAV-I
[mks_icon icon=”fa-arrow-right” color=”#22c99f” type=”fa”] Las muestras que obtuvieron un cociente S/P menor o igual a 0,499, que corresponde a un título ELISA de 1070, se consideraron negativas.
[mks_icon icon=”fa-arrow-right” color=”#22c99f” type=”fa”] Las muestras que obtuvieron un cociente S/P mayor o igual a 0,5, que corresponde a un título ELISA de 1070, se consideraron positivas.
Resultados
En las Tablas 1 y 2 se detallan los resultados obtenidos, tanto en pollos como en reproductoras, agrupados por edad.
En las columnas se especifica la edad de los animales en el muestreo, el número de lotes analizados, la media aritmética de los títulos ELISA, el título máximo y mínimo y la desviación estándar (SD).
Tabla 1. Títulos ELISA FAV-I obtenidos en pollos.
Tabla 2. Títulos ELISA FAV-I obtenidos en reproductoras
En los Gráficos 1 y 2 se refleja la evolución de los títulos ELISA en pollos y reproductoras en relación a la edad.
El estudio serológico reveló que la mayoría de reproductoras pesadas y de pollos nacen con elevadas tasas de anticuerpos frente a FAV-I. De los 15 lotes de broilers de un día analizados, 14 (93,33%) obtuvieron títulos ELISA superiores a 10.000 y sólo un lote obtuvo un título medio por debajo de 10.000, concretamente 9.861.
En el caso de las reproductoras, 33 lotes (97,05%) de 34 obtuvieron títulos ELISA superiores a 10.000 mientras que el título del lote restante fue muy inferior, 1.418. La tasa de anticuerpos maternos frente a FAV-I, decrece hasta prácticamente desaparecer aproximadamente a los 21 días de vida, tal y como ocurre con el resto de anticuerpos maternos frente a otros antígenos.
La seroconversión por contacto natural con FAV-I, se produce hacia los 35 días de vida en pollos y a las 15 semanas en reproductoras.
El título aumenta en proporción a la edad. Existen diferencias significativas entre los títulos ELISA de los lotes de pollos asintomáticos de los que han padecido HCI. Los títulos máximos que se obtuvieron a los 35 y 46 días de vida, 14.501 -Gráfico 4- y 12.853, pertenecen a dos lotes donde se diagnosticó un brote de HCI. El 70,59% de títulos entre los 35 y 53 días de vida fueron inferiores a 5.000.
En los Gráficos 3 y 4 se muestra un ejemplo claro de seroconversión en un caso (4489/2011) de Hepatitis por Cuerpos de Inclusión en pollos. Se realizó el muestreo a los 16 y 38 días de vida.
Gráfico 3. Histograma ELISA FAV-I correspondiente al caso 4489/2011. Pollos de 16 días de vida
Gráfico 4. Histograma ELISA FAV-I correspondiente al caso 4489/2011. Pollos de 38 días de vida
Gráfico 1. Evolución con la edad de los títulos ELISA FAV-I en pollos.
Gráfico 2. Evolución con la edad de los títulos ELISA FAV-I en reproductoras
Muestras
Los análisis se realizaron a partir de secciones de hígados frescos o congelados y, en algunos casos, a partir de improntas de hígado en tarjetas FTA.
Las muestras provenían de lotes de recría de reproductoras y broilers, que llegaron al CESAC desde diversos puntos de España. El muestreo fue a diferentes edades.
Resultados
2012
Durante el 2012, se recibieron muestras de 62 casos sospechosos en broilers, detectándose FAV-I en 43,5%. El análisis filogenético reveló que el 3,7% de los virus pertenecían al serotipo FAdV-8a, 55,6% al serotipo FAdV-8b, 22,2% al serotipo FadV-11. Un 18,5 % de los virus detectados no se secuenciaron -Gráfico 5-.
2013
De los 58 casos sospechosos en broilers recibidos en 2013, se detectaron en un 29,3% de las muestras. Tras el análisis filogenético el 5,9% de los virus pertenecían al serotipo FAdV-8a y el 76,5% al serotipo FAdV-8b. Un 17,6 % de los virus detectados no se secuenciaron -Gráfico 6-.
2014
En 2014 se recibieron un total de 123 muestras de las cuales un 38,2% fueron positivas. Tras el análisis filogenético el 74,5% de los virus pertenecían al serotipo FAdV-8b y el 19,1% al serotipo FAdV-11. Un 6,4% de los virus detectados no se secuenciaron -Gráfico 7-.
2015
Desde enero a octubre de 2015, se recibieron un total de 161 muestras. Un 41,6% resultó positivo. El 52,2% de los virus pertenecía al serotipo FAdV-8b y el 40,3% al serotipo FAdV-11. Un 7,5 % de los virus detectados no se secuenció -Gráfico 8-.
De los resultados obtenidos en muestras procedentes de lotes de broilers durante estos años, podemos deducir que los serotipos predominantes, implicados en los brotes de HCI en España, fueron FAdV-8b y FAdV-11.
Durante los años 2011, 2012, 2013 y 2014, se recibieron muestras de casos de HCI en lotes de recría de reproductoras pesadas.
Al igual que en pollos, los serotipos implicados fueron FAdV-8b y FAdV-11. Los síntomas y lesiones observados en todos los casos fueron similares.
El inicio del proceso fue entre los 11-16 días de vida y se presentó con depresión, postración y mortalidad repentina, con un pico de mortalidad a los 3 días y que a los 6-7 días desapareció.
La morbilidad y mortalidad en general no fue muy alta, aunque en un lote de recría de reproductoras la mortalidad llegó al 50%.
Tanto en pollos como en recría de reproductoras, la lesión macroscópica más representativa fue hepatomegalia, hígado pálido y friable con presencia de hemorragias petequiales. Otras lesiones observadas fueron: hidropericardio, esplenomegalia, nefritis y hemorragias petequiales en músculo -Imágenes 1 a 5-.
