Conociendo el problema
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La Enfermedad de Marek (MD -del inglés Marek’s Disease) es una grave amenaza para la industria avícola y su control depende mayoritariamente de una vacunación eficaz. Cuando se produce un brote de MD, la mayoría de las compañías llevan a cabo una auditoría de los protocolos de vacunación en incubadora. Adicionalmente, otros aspectos críticos deben ser monitorizados para poder comprender mejor el origen del brote. En este artículo se analiza un brote de MD de forma progresiva para resaltar los principales factores responsables de los fallos de vacunación/protección.
Los puntos críticos para establecer una inmunidad adecuada frente a MD incluyen:
Una adecuada monitorización de la vacunación puede realizarse mediante la medición de la replicación del virus vacunal en el pollito de una semana de vida. Monitorizar la vacunación no solo proporciona información sobre la protección del lote frente a MD, sino que también sirve para confirmar que la vacunación se ha hecho correctamente La protección frente a MD puede monitorizarse mediante la evaluación de la carga viral de MDVs oncogénicos en pollitos a partir de las 3 semanas de vida. En caso de que se sospeche de virus más virulentos, se puede determinar el patotipo de las cepas aisladas para establecer el programa vacunal apropiado. Comprender todos los puntos críticos mencionados es la única forma de mejorar de forma efectiva los métodos de control de MD.
Conociendo el problema
La enfermedad de Marek (MD) es una enfermedad linfoproliferativa causada por el virus de la Enfermedad de Marek (MDV), un herpesvirus que afecta a los pollos. La enfermedad de Marek se ha logrado controlar con éxito desde finales de los años 60. Sin embargo, esporádicamente se producen brotes de MD en lotes vacunados, provocando pérdidas económicas significativas y una gran preocupación para la industria avícola. Una vez que se ha confirmado un brote de MD, es importante evaluar todos los puntos críticos que hayan conducido a un fallo en la inmunización. En el presente artículo se repasan los pasos a seguir para investigar un brote de MD (Figura 1).
Cuando se produce un brote de MD, las compañías deben realizar una auditoría de la vacunación para comprobar que las vacunas se manipulan correctamente y que ninguno de los pasos mencionados anteriormente se ha visto afectados.
Verificación de la vacunación
Las vacunas MD están asociadas a células y requieren de cuidados especiales durante el almacenamiento, la reconstitución y la administración.
Las vacunas MD son suspensiones inestables de células y una mezcla inadecuada resulta en una baja uniformidad de las dosis. Asimismo, la mezcla periódica de la vacuna es necesaria para evitar la sedimentación de las células. La vacuna reconstituida debe mantenerse refrigerada y debe ser utilizada rápidamente (30-60 minutos).
La adición de antibióticos, otros aditivos u otras vacunas a las vacunas MD pueden afectar significativamente al título de anticuerpos frente a las mismas
Titulación de la vacuna (ensayo de placa)
La titulación de las vacunas MD se puede hacer mediante ensayo de placa. Es importante que la titulación se haga:
El contaje de células vivas ha demostrado ser una alternativa para valorar el manejo que se realiza en la planta de incubación. Aunque el contaje de células no proporciona información sobre la cantidad de virus vacunal presente en la vacuna, al menos puede proporcionar pruebas directas de un manejo inadecuado si el número de células muertas es muy elevado o si aumenta rápidamente tras su reconstitución.
Monitorización de la replicación de la vacuna en los pollos
La replicación de la vacuna se puede evaluar mediante la determinación del ADN viral en el folículo de la pluma o el bazo. El uso de sangre no está recomendado ya que se han notificado muchos falsos negativos. Monitorización de la replicación de la vacuna en los pollos Los resultados obtenidos a partir de muestras de bazo y de pulpa de la pluma son muy compatibles, teniendo la pulpa de la pluma una ventaja logística al poder obtenerse a partir del pollo vivo. Es esencial recoger muestras individuales de los pollos
1 semana de vida
El mejor momento para monitorizar la vacunación es cuando los pollos tienen 1 semana de vida, ya que es posible diferenciar los pollos que han recibido la dosis completa de los que han recibido la dosis diluida. A partir de las 3 semanas de vida, el virus vacunal puede ser detectado en la mayoría de los pollos, independientemente de la dosis vacunal administrada. El porcentaje de muestras en las que el virus vacunal puede ser detectado la primera semana de vida depende de:
Se han descrito cebadores específicos para cada serotipo y son empleados frecuentemente para diferenciar entre las vacunas de los serotipos 2 y 3, y los virus del serotipo 1. Cuando se emplea la cepa vacunal CVI988 del serotipo 1, es necesario usar cebadores específicos de CVI988 y que no amplifiquen otros serotipos 1 de MDV. Esta técnica requiere de unas condiciones rigurosas, debiendo ser muy cuidadosos durante su realización, así como a la hora de interpretar sus resultados.
Monitorización de la infección temprana con MDV oncogénico
Tras la administración de las vacunas MD, se tardan aproximadamente 5-7 días para alcanzar el nivel máximo de protección. La infección con MDVs oncogénicos a menudo ocurre antes de los 5-7 días en las granjas, lo cual pone en riesgo la eficacia de la vacuna. Es posible determinar si se ha producido una infección temprana del lote mediante la cuantificación de la carga de ADN de MDV en el folículo de la pluma, bazo o sangre de pollos de 1 semana de vida.
Monitorización de la protección/diagnóstico temprano
Recientemente, hemos demostrado que la evaluación de la carga de ADN de MDV en el folículo de la pluma o en muestras de sangre a partir de las 3 semanas de edad puede ser útil para predecir la protección de un lote (9-11).
Si se recogen muestras de sangre, es importante que el anticoagulante empleado sea EDTA, siendo esencial evitar que se mezclen muestras de diferentes aves. Las muestras pueden ser almacenadas a -70⁰C o recogidas en tarjetas FTA® y mantenidas a temperatura ambiente
En los lotes protegidos adecuadamente frente a MD, la mayoría de los pollos tienen una carga baja de ADN de MDV, compatible con niveles de latencia.
Sin embargo, en los lotes que no están protegidos correctamente, muchos pollos tienen una elevada carga de ADN viral en unos niveles comparables a los tumores inducidos por MDV.
Patotipificación de MDV
A pesar de que se han hecho varios intentos para encontrar marcadores moleculares de virulencia, hasta el momento la única forma de determinar el patotipo de los MDV aislados es a través de pruebas biológicas
Un diagnóstico certero de la MD es muy importante para descartar otras enfermedades tumorales inducidas por virus o síndromes no-neoplásicos causantes de lesiones nerviosas. Sin embargo, una vez que se ha confirmado la MD, es necesario investigar el brote e identificar los factores que contribuyeron a él. En muchos casos hay más de un factor, pero la única forma de encontrar una solución adecuada es mediante la comprensión de las causas desencadenantes del brote
Prueba Gold Standard
La prueba “Gold Standard” o de referencia se basa en medir la capacidad del MDV de alterar la inmunidad proporcionada por varias vacunas MD, estando los MDV virulentos (vMDV) protegidos por HVT; los MDV muy virulentos (vvMDV) protegidos por HVT+SB-1; y los MDV muy virulentos plus (vv+MDV) protegidos por CVI988.
Estudio Análisis
Cuando se sospecha de un incremento de la virulencia se recomienda investigar si el protocolo vacunal empleado puede proteger efectivamente frente a esos aislados en concreto.
Otras alternativas
Se han descrito pruebas alternativas a la prueba patotipificación “Gold Standard”, como la atrofia de los órganos linfoides, neuropatotipificación y carga de ADN viral. Todas las pruebas alternativas pueden diferenciar fácilmente entre v y vv+, pero son incapaces de discernir entre MDV vv y vv+. Será necesario llevar a cabo más estudios para simplificar la patotipificación de MDV y para hacer que tenga una mayor disponibilidad para otros laboratorios.
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