Cómo obtener el máximo beneficio de una Prueba de Sensibilidad Anticoccidiana (AST)

Aunque las vacunas vivas son efectivas cuando se administran correctamente, las coccidias vacunales tienen que multiplicarse varias veces en los intestinos para generar buena inmunidad. 

• Como resultado de estas multiplicaciones, se producen lesiones intestinales leves que además generan una respuesta inflamatoria que produce un exceso de moco intestinal, y este sirve de substrato para la multiplicación exagerada de cepas patógenas de Clostridium perfringens. 
  • Estas no pueden controlarse mediante el uso de antibióticos en las aves producidas sin antibióticos, dando como resultado final la aparición de brotes de EN.  
  • Por lo tanto, es muy probable que el uso de las vacunas vivas también haya desempeñado un papel en la aparición de la EN como la enfermedad más importante en las aves producidas sin antibióticos. 

Con el objeto de predecir la efectividad de los agentes anticoccidianos en el campo, se han desarrollado y utilizado Pruebas de Sensibilidad Anticoccidiana, AST, de sus siglas en Inglés.

¿QUÉ ES UNA PRUEBA DE AST?

Una AST es una prueba de laboratorio en la que coccidias aisladas a partir de muestras de campo (generalmente, excretas o cama) de diferentes granjas de un complejo de producción, se analizan bajo condiciones controladas para determinar su sensibilidad a varios agentes anticoccidianos con el fin de predecir su eficacia en el campo.

¿POR QUÉ SON IMPORTANTES LAS PRUEBAS DE AST?

Para optimizar la selección de los agentes anticoccidianos en el campo, es fundamental conocer el perfil de sensibilidad de los parásitos en cuestión.  

La AST es el mejor método actualmente disponible para evaluar y predecir la eficacia de los agentes anticoccidianos contra aislamientos de campo de Eimeria spp. en la producción comercial de pollos y pavos de engorda. 

• • Varios investigadores y veterinarios de campo han enfatizado la importancia de realizar las pruebas de AST para la detección temprana de resistencia o “sensibilidad reducida” a las coccidias antes de que la productividad de la parvada se vea afectada negativamente.
  • Las AST también se utilizan para determinar la eficacia anticoccidiana en estudios de aprobación de agentes anticoccidianos nuevos. 
  • Las AST son un predictor útil de la eficacia anticoccidiana cuando los aislamientos de campo de Eimeria spp. son representativos de los existentes en un complejo de producción comercial. 

• También son útiles para detectar cambios tempranos en la sensibilidad a los agentes anticoccidianos.

¿CÓMO SE DETERMINA LA SENSIBILIDAD?

La sensibilidad se puede determinar de varias maneras, algunos han sugerido comparando las diferencias en el aumento de peso corporal entre el grupo tratado y los controles negativos y positivos. Mientras que otros han sugerido la excreción de ooquistes, un índice anticoccidiano o la ganancia de peso corporal y conversión alimenticia.

Sin embargo, dado que los agentes anticoccidianos están diseñados para prevenir la coccidiosis, según L.R. McDougald, comparar las reducciones porcentuales en las puntuaciones de las lesiones entre los controles tratados y negativos y positivos es el parámetro más importante para detectar cambios en la sensibilidad. 

Por lo tanto, aunque la ganancia de peso corporal, la tasa de conversión alimenticia y la viabilidad se registran por su importancia económica, en este artículo, el porcentaje de reducción en las puntuaciones de lesiones será el parámetro utilizado para evaluar la sensibilidad de las coccidias a partir de aislamientos de campo.

RECOLECCION Y ENVÍO DE MUESTRAS

Antes de recolectar muestras, es importante determinar qué agentes anticoccidianos y qué dosis de inclusión en la ración se utilizarán en las AST para que el laboratorio garantice que tienen todos los anticoccidianos necesarios dentro del período de vencimiento. 

• También es una buena idea mezclar todas las raciones experimentales con anticipación y analizar la concentración de cada anticoccidiano antes de iniciar la prueba para comprobar que los anticoccidianos se hayan adicionado y mezclado correctamente.
• Una parte muy importante de un AST es la recolección y envío de muestras al laboratorio. Esto es importante para preservar la viabilidad de los ooquistes presentes en la muestra y para que esta sea verdaderamente representativa de las Eimeria spp. presentes en el complejo de producción de donde se recolectaron las muestras. Dado que no es posible, ni necesario, muestrear todas las granjas en un complejo de producción, será suficiente una obtener muestras de entre 5 y 10 granjas. 

Como afirma H. D. Chapman “es probable que los resultados de una granja sean similares a los de otras granjas dentro del mismo complejo de producción, siempre que se haya empleado el mismo programa de quimioprofilaxis para prevenir la coccidiosis”.

Las muestras de excretas o cama se deben recolectar de al menos 6 lugares dentro de la sección de crianza del galpón siguiendo un patrón en zigzag.  

• Si se recolecta cama, esta debe recolectarse del tercio superior de la cama y en cantidad suficiente para llenar un contenedor de un galón, 
• Si se recolectan excretas, deben recolectarse al menos 24 excretas frescas, incluyendo tanto excretas intestinales, como cecales. 

Para aumentar la probabilidad de recuperar suficientes ooquistes para preparar los inóculos desde el primer pase, se deben recolectar muestras de parvadas que tengan entre 21 y 28 días de edad que es cuando la excreción de ooquistes es mayor.

Las muestras deben enviarse al laboratorio a donde se llevarán a cabo las AST en una hielera bien sellada por correo de entrega urgente al día siguiente, y se deben adicionar algunas bolsas de hielo para evitar que las muestras se sobrecalienten durante el transporte. Se debe evitar que las muestras se sobrecalienten, pero no permitir que se congelen, ya que tanto el calor como el frío en exceso son perjudiciales para la supervivencia de los ooquistes.

DESCRIPCIÓN DE LA PRUEBA

INÓCULO

Una vez recibidas las muestras de excretas o cama, estas se mezclan con la ración y se alimentan a pollos de engorda libres de coccidias mantenidos en jaulas con piso de alambre. 

• • Las excretas de estas aves se recogen durante el periodo de los 4 a 7 días después y los ooquistes se recuperan, limpian, esporulan y concentran (~ 1 x 105 ooquistes esporulados/ml). 

• Una vez preparado el inóculo, este se almacena en condiciones adecuadas (4ªC) hasta el día del desafío.

AST

El primer día de la prueba, los pollitos se reciben de la incubadora y se distribuyen al azar en corrales de piso libres de coccidias con cama nueva de viruta de madera. Se alimentan con una ración de iniciación estándar libre de agentes anticoccidianos hasta el día 12. 

• • El día 12, los pollos se distribuyen aleatoriamente a cada jaula (generalmente 8/jaula) y se cambian a sus respectivas raciones experimentales. 
    • Por lo general, hay de 3 a 5 repeticiones/tratamiento. 

• Los pollos asignados a los controles negativo y positivo continúan recibiendo una ración no medicada,

• • Mientras que los pollos tratados son alimentados con raciones que contienen los anticoccidianos en las concentraciones dietéticas que se probarán en cada tratamiento. 

• El día 14, todos los pollos, excepto el control negativo, se inoculan con el inóculo preparado previamente a partir de las muestras de excretas o cama titulado para que contenga aproximadamente 1 x 105 ooquistes esporulados de Eimeria spp/ml. 

• El inóculo se administra por sonda oral con una jeringa graduada. 
• En el caso de los pollos, el inóculo suele contener una mezcla de Eimeria acervulina, E. maxima y/o E. tenella. 
• También el día 14, se pesan todos los pollos por jaula y se calcula el peso promedio por pollo y se registra como el peso inicial. 
• En este momento, también se registra la cantidad de alimento administrado a cada jaula para calcular el índice de conversión alimenticia al final de la prueba. 

• El día 20 (6 días post-inoculación), todos los pollos de cada jaula se pesan de nuevo para calcular el aumento promedio de peso corporal. 

• También el día 20, se pesa el alimento restante para calcular el índice de conversión alimenticia para cada tratamiento. 

• Ese mismo día, los pollos se sacrifican humanitariamente para extirpar los tractos intestinales y calificar la severidad de las lesiones intestinales inducidas por el desafío con coccidias por el método de Johnson y Reid.

INTERPRETACIÓN

• Basado en el manuscrito de L.R. McDougald, si los puntajes de lesión para cualquier región dada del tracto intestinal (superior, medio, inferior o ciego) se reducen en 50% o más, las coccidias se consideran sensibles al anticoccidiano respectivo. 
• Mientras, si las puntuaciones de las lesiones se reducen entre 49% y 30%, las coccidias se consideran de sensibilidad intermedia al anticoccidiano respectivo. 
• En tanto, si las puntuaciones de las lesiones se reducen en 29% o menos, las coccidias se consideran resistentes al anticoccidiano respectivo.

OTRAS CONSIDERACIONES

A pesar de que un AST solo dura 20 días, las muestras primero deben remitirse al laboratorio y pasarse en pollitos libres de coccidias para preparar el inóculo (en ocasiones, se requiere de un segundo pase para obtener la concentración de ooquistes deseada).

• • Después, los pollitos deben ordenarse con anticipación, las raciones experimentales tienen que mezclarse y analizarse. 
  • Finalmente, los resultados deben tabularse para remitir un reporte final, de modo que esperar resultados antes de 8 semanas, y más probablemente 10 semanas, no es realista. 
  • Además, idealmente, se debe realizar un estudio preliminar de titulación de dosis con las coccidias aisladas para determinar la dosis que producirá suficientes lesiones macroscópicas y depresión del crecimiento sin mortalidad (esto aumentará aún más el tiempo en el que se podrá obtener el reporte final).
  • El mayor beneficio de realizar las pruebas de AST se deriva de analizar muestras de un complejo de producción al menos una vez al año. 
  • Con el tiempo, se pueden generar y utilizar evaluaciones razonables de la eficacia o grado de resistencia presente en el complejo de producción, con el objetivo de diseñar programas de quimioprofilaxis más efectivos. 
  • De igual manera, por consistencia, es mejor usar el mismo laboratorio para las pruebas de AST. 

• También es importante enviar muestras representativas, asegurándose de que no estén expuestas a la luz solar directa, al calor o al frío excesivos y que se envíen por correo urgente para favorecer la supervivencia de los ooquistes. 

• • Recuerde que tener que realizar un segundo pase no es deseable, ya que la proporción de especies de Eimeria en la muestra original puede alterarse y dar un resultado erróneo de la sensibilidad.

• Los formularios de envío deben completarse en su totalidad, indicando el historial previo de uso de anticoccidianos y detallando qué agentes anticoccidianos y qué dosis se probarán en la prueba de AST.

CONCLUSIÓN

A medida que la industria avícola produce un mayor porcentaje de aves sin antibióticos y anticoccidianos de la clase de los ionóforos, y depende más de los anticoccidianos sintetizados químicamente, las pruebas de sensibilidad a los anticoccidianos (AST) pueden proporcionar una herramienta muy valiosa para diseñar programas más efectivos para la prevención y el control de la coccidiosis. 

• Mantener la eficacia de los agentes anticoccidianos para prevenir la coccidiosis es importante para minimizar la incidencia de Enteritis Necrótica, que se ha convertido en la enfermedad más importante en las aves criadas sin antibióticos.

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