IBMAP DE ZOETIS: UNA HERRAMIENTA DE MONITORIZACIÓN EPIDEMIOLÓGICA DEL VIRUS DE BRONQUITIS INFECCIOSA AVIAR EN ESPAÑA

Desde hace más de una década Zoetis España realiza monitorización de las cepas presentes en el sector avícola español por medio de técnicas de biología molecular.

El protocolo para los estudios de biología molecular es el siguiente:

• Muestreo en aves con hisopos secos.
• Grupos de 10 hisopos máximo por unidad/lote, los cuales serán procesados en forma de pool.
• Hisopados provenientes de tráquea y cloaca son los más usuales, aunque también se pueden tomar de coanas, tonsilas cecales y riñones.
  • En aves de larga vida y sin presencia de clínica respiratoria y con problemas de puesta la preferencia es vía cloaca, ya que el virus se excreta a ese nivel durante muchas semanas, mientras que en la tráquea a partir de los 7 días baja considerablemente.
  • En pollos de engorde con signos respiratorios la preferencia es a nivel de la tráquea. Si es una monitorización de rutina se suele realizar al final de su vida productiva a nivel cloacal.
• Cada hisopo puede ser empleado para muestrear 1, 2 o 3 aves, ampliando así el grupo muestral.
• Envío al laboratorio de diagnóstico molecular.

Con la extracción del ARN presente en el pool de hisopos se realiza una primera RT-PCR aCoV para detectar la presencia de cualquier coronavirus.

• En aquellas muestras donde se detecta presencia de virus de BIA se realiza, a continuación, una qRT-PCR con 11 primers/sondas específicas en paralelo de 11 genogrupos (Massachusetts, D274, 793B, D1466, Italy02, Arkansas, QX, Israel Variant2, Q1, IB80 y D181), que permite la detección de diferentes variantes genotípicas presentes en la misma muestra de manera simultánea.

Cuando comparamos esta técnica con la secuenciación Sanger, la PCR Multiplex permite la detección de distintas cepas presentes y no sólo la dominante en una misma muestra, permitiendo de esta manera disponer de una foto más completa de cada caso.

Dependiendo de la situación, a veces es necesario realizar adicionalmente un estudio de secuenciación.

Para esto se utiliza la secuenciación Sanger sobre un fragmento de 500 pares de bases del gen que codifica a la proteína S1 de la espícula.

• La secuencia resultante es analizada filogenéticamente basándose en la comparación con secuencias de cepas vacunales y de campo conocidas.

Los casos en los que puede ser necesario o interesante realizar una secuenciación Sanger son:

• Cuando la muestra es positiva a la primera RT-PCR aCoV pero negativa a los 11 primers/sondas. En estos casos puede existir la sospecha de que hay una nueva variante que escapa a la detección de los primers/sondas de los distintos genogrupos incluidos, o que una variante ha sufrido cambios que han permitido que escapen a la detección de la técnica.
• Cuando los valores CT (del inglés Cycle Threshold y que representan el número de ciclos que ha tenido que realizar el secuenciador hasta poder detectar el virus) de la RT-PCR aCoV y del resultado de la qRT-PCR con los 11 primers/ sondas específicas no tienen una buena correlación.

Por ejemplo, cuando se detecta virus de BIA con un valor CT de 20 y posteriormente se detecta un virus del genogrupo QX con una valor CT de 30, esta diferencia entre los valores CT nos está indicando que hay una gran cantidad de virus que no está detectando la PCR Multiplex.

• Este es el caso por ejemplo de la cepa tipo-V1397 que no es detectada por el primer/ sonda de la cepa D1466 que pertenecen a mismo genotipo GII-1 porque han sufrido cambios que hacen que no pueda ser detectada por esa vía.

Zoetis España ha puesto a disposición de los veterinarios avícolas, una página web con un mapa interactivo en el que se vuelcan todos los resultados históricos obtenidos a raíz de la gran cantidad de muestras procesadas cada año.

• Dichos resultados son provenientes de muestras de clientes de toda España, tanto de lotes de aves sospechosos de BIA como de muestras obtenidas a partir de monitorizaciones rutinarias.

La navegación permite examinar los resultados obtenidos desde 2017 hasta la actualidad, pudiendo realizar un filtrado de los resultados por tipo de cepa, región geográfica y tipo de ave (broiler, ponedora y reproductora).

• La base de datos es actualizada periódicamente durante el año.

A continuación, podemos ver un ejemplo de resultados filtrados de los últimos 3 años (2021 al primer semestre del 2023) y los gráficos generados por medio de la web IB Map.

Cepas en Ponedoras del 2021 al 2023: En este gráfico podemos observar la elevada presencia de positivos de la cepa QX y 793B y la aparición de las nuevas cepas IB80 y tipo-V1397 en gallinas ponedoras. (Gráfico 2)

Cepas en Reproductoras del año 2021 al 2023: En esta gráfica podemos ver las cepas detectadas en reproductoras los años 2021 y 2022 con presencia de QX y 793B, pero con incremento de las cepas IB80 y tipo V1397. (Gráfico 3)

Cepas en Broilers del 2021 al 2023: Se puede observar la elevada presencia de la cepa QX, seguida de la cepa 793B, seguida de la cepa Mass y en menor medida de cepas D181 e Italy02. (Gráfico 4).

Cepas en Broilers por Región del 2021 al 2023: En las regiones con mayor producción de broilers (Andalucía, Cataluña, Castilla La Mancha, Castilla y León y Comunidad Valenciana), la presencia de la cepa QX es mayoritaria en campo. (Gráfico 5).

Con esta herramienta puesta a disposición de los veterinarios, Zoetis contribuye a la difusión del conocimiento de la epidemiología de la BIA para un mejor control por medio de los planes vacunales.

Las vacunas comerciales disponibles en el mercado español tanto vivas como inactivadas son:

En el caso de aves de larga vida (ponedoras y reproductoras), se emplean las distintas cepas vivas vacunales disponibles en diversas combinaciones, seguidas con una vacuna inactivada que puede contener una o dos cepas de BIA.

• La cepa QX de campo como lo indican los estudios de biología molecular, sigue estando presente, especialmente en las aves de larga vida, por lo que la inclusión de esta vacuna en el programa vacunal es altamente recomendable.

Con la aparición de las nuevas cepas pertenecientes a los genotipos GII-1 (tipo V1397), GII-2 (D181) y GVIII-1 (PA/1220/98, con una muy elevada similitud con la cepa IB80 aunque esta última aún no ha sido aceptada oficialmente en la nueva clasificación),

• la recomendación sobre todo en aves con alto valor económico, es tratar de ampliar al máximo el espectro de la respuesta inmune generada por las aves utilizando las distintas cepas disponibles comercialmente, tanto vivas como inactivadas,
• para que el ave pueda reconocer lo más ampliamente posible a las distintas variantes de virus, tal como lo demuestran diversos trabajos publicados (Bru, 2023; Carranza, 2023).

En pollos de engorde, donde la principal cepa de campo patógena es la cepa tipo QX, una opción a considerar es el uso de una cepa tipo Mass con una cepa tipo QX.

• Además de proteger frente a su homóloga de campo, está demostrado que brinda una excelente protección frente a la cepa tipo 793B (De Wit, 2022).

En aves de larga vida, es recomendable, especialmente en áreas con un alto riesgo de BI, que se utilicen vacunas inactivadas para obtener una mayor protección contra la BI y, en general, que se utilicen más cepas de vacuna para lograr un refuerzo amplio y heterólogo. «De Wit, More is Better» When Vaccinating Layers and Breeders against IB, The Poultry Site, 2012.

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