El diagnóstico molecular como la herramienta más precisa en la diferenciación de las cepas vacunas

Las características de sensibilidad o resistencia a determinados antibióticos son características adquiridas por la bacteria vacunal en el proceso de modificación de sus características de inmunogenicidad, excreción y/o, atenuación.

• Sin embargo, estas características son puramente fenotípicas y carecen de la precisión que puede tener una técnica molecular basada en la identificación de material genético.

La salmonelosis es una de las zoonosis que mayor impacto tiene en la salud humana provocando procesos gastrointestinales que pueden ser de diferente gravedad, pudiendo llegar a ocasionar problemas severos en las personas infectadas.

La infección se suele producir por el consumo de alimentos de origen animal y en especial por el consumo de huevos y carne de ave contaminada y con un inadecuado tratamiento culinario.

Para disminuir lo máximo posible la prevalencia de la salmonelosis en aves, y con ello la posterior transmisión a las personas, la Unión Europea estableció unas pautas para el control de la enfermedad que posteriormente dieron lugar a los Programas Nacionales de Control de Salmonella (PNCS) donde se indican todas las medidas encaminadas a reducir la Salmonella en aves.

Actualmente, el diagnóstico de salmonella en aves se realiza a través una metodología basada en la norma ISO 6579 y que consiste en el análisis de las diversas muestras utilizando distintos medios de cultivo que nos permiten el aislamiento y posterior identificación de la cepa de salmonella.

A partir de la identificación de una cepa de Salmonella Zoonótica (Salmonella Enteritidis o Salmonella Typhimurium) es necesario identificar la cepa vacunal en el caso de que se hayan utilizado vacunas vivas.

Este procedimiento analítico, cuando se basa en la sensibilidad frente a determinados antibióticos, puede presentar imprecisiones (cepas de campo con el mismo perfil antibiótico) limitaciones de interpretación y un tiempo excesivo en la obtención del resultado, teniendo en cuenta que el avicultor necesita la máxima rapidez para determinar la existencia de un positivo de campo.

El diagnóstico por PCR ofrece numerosas ventajas con respecto a otras técnicas, entre las que destacan principalmente:

• Una mayor sensibilidad (pudiendo diferenciar a nivel molecular entre distintas cepas bacterianas)
• Mayor rapidez en la obtención de resultados, aspecto muy importante sobre todo para llevar a cabo acciones de gran repercusión dentro de las granjas en las que se toman muestras dentro de los Programas Nacionales de Control de Salmonella.

Las técnicas de PCR han ido evolucionando desde la PCR tradicional hasta la PCR en tiempo real o RT (Real Time).

La PCR a tiempo real es la más usada actualmente para el diagnóstico de numerosas enfermedades importantes en sanidad animal.

A diferencia de la tradicional -en la cual se trabaja únicamente en el plano cualitativo y además es necesario acoplar otras técnicas para la obtención de resultados (como por ejemplo la electroforesis) la PCR a tiempo real permite el seguimiento continuo y la cuantificación de datos, sin ningún tratamiento posterior.

Una de las aplicaciones principales de esta técnica en el diagnóstico de la salmonelosis en aves es la posibilidad de distinguir entre las cepas presentes en las diferentes vacunas autorizadas como las vacuna de Calier Primun Salmonella E y Primun Salmonella T y las cepas de campo.

Basados en esta tecnología se están desarrollando distintos test de diagnóstico DIVA (Differentiating Infected from Vaccinated Animals) que, además de esta diferenciación entre cepas vacunales y de campo, también nos permite realizar controles de la excreción de las cepas vacunales, así como detectar su presencia en distintos tipos de muestras.

• Todo esto es de gran ayuda para hacer seguimientos de las vacunaciones realizadas en las granjas.

El continuo avance y desarrollo de estas técnicas de biología molecular va a proporcionar herramientas que van a ser de mucha ayuda en todo lo relacionado con el diagnóstico de salmonelosis en aves, así como en otras patologías importantes en avicultura.

CALIER TRABAJA PRECISAMENTE EN EL DESARROLLO DE ESTAS TÉCNICAS DE DIAGNÓSTICO

La técnica en sí misma, así como la utilización de formatos de transporte (tarjetas FTA) van a permitir agilizar el diagnóstico y utilizar técnicas de la máxima precisión tanto para la identificación de las especies de Salmonella como para la diferenciación entre cepas vacunales y cepas de campo.

En este sentido, además de disponer ya de un PCR comercial (Kylt SE DIVA 2) para la diferenciación de la cepa de Salmonella enteritidis de Primun Salmonella E, Calier ha desarrollado -en colaboración con la empresa de biotecnología Genetic PCR solutions- un PCR para la diferenciación de la cepa vacunal de Salmonella Typhimurium contenida en Primun Salmonella T.

Esta PCR se basa en la detección de regiones diferentes y exclusivas del genoma de la bacteria a las que se ha llegado por comparación con las secuencias descritas en NCBI (National Center for Biotechnology Information) que incluye más de 500.000 secuencias diferentes para Salmonella spp.

La posibilidad de diferenciación está acorde con las directivas expresadas en los programas nacionales de control de salmonella que exigen que las vacunas atenuadas dispongan de un método adecuado para diferenciarse bacteriológicamente.